ПЦР ВИЧ-инфекции

Одно из важнейших достижений в диагностике и лечении ВИЧ-инфекции последних лет — разработка количественных тестов для определения содержания вирусных частиц в плазме крови — показателя размножения вируса в зараженных клетках.

Количество молекул вирусной РНК пропорционально числу вирусных частиц. Содержание РНК в 1 мл плазмы называется вирусной нагрузкой и составляет от нескольких единиц до 10⁷ копий РНК и более. Обнаружение столь малых количеств РНК стало возможным благодаря развитию новых молекулярно-биологических технологий, в частности метода полимеразной цепной реакции (ПЦР), позволяющих размножить РНК и ДНК в пробирке, для того чтобы количество образующихся продуктов можно было оценивать с помощью инструментальных методов.

Вирусная нагрузка является одним из важнейших показателей эффективности терапии ВИЧ-инфекции, поскольку быстрее других данных, а главное, непосредственно отражает состояние процесса размножения вируса в организме пациента.

Через несколько недель или месяцев после заражения в крови ВИЧ-инфицированного появляются антитела к белкам ВИЧ, которые на этом этапе инфекции достаточно эффективно удаляют вирус из организма. При этом наблюдается значительное снижение вирусной нагрузки. Вслед за этим начинается продожительный (до 10 лет) период клинически бессимптомной инфекции, который характеризуется относительно низкими значениями вирусной нагрузки и постоянным медленным снижением иммунитета. За внешней стабильностью этого периода скрывается ожесточенная борьба вируса и иммунной системы, которая приводит в постепенному истощению иммунной системы.

Измерения вирусной нагрузки в периферической крови ВИЧ-инфицированных показали, что высокие уровни содержания вируса могут коррелировать с увеличением риска клинической прогрессии заболевания.

Количество вируса в крови можно измерить по белку р24 в плазме количественным титрованием, выращиванием ВИЧ в культуре или непосредственно измерить вирусную РНК в плазме, используя амплификацию нуклеиновой кислоты. Польза информации о количестве белка р24, как маркера вирусной нагрузки, ограничена, так как этот белок выявляется только у 20% бессимптомных пациентов и у 40–50% пациентов с симптомами.

Инфекционный ВИЧ из плазмы можно культивировать, заражая активированные мононуклеарные клетки крови от здоровых доноров. Количественный культуральный метод имеет ограничения при мониторинге уровня вируса, поскольку только небольшая часть фракции вирусных частиц инфекционна in vitro. Инфекционный вирус часто не определятся у бессимптомных лиц. Количество РНК ВИЧ в плазме можно определить, как уже упоминалось выше, благодаря технологии амплификации нуклеиновой кислоты по методике ПЦР.